罗格列酮5-Aza干预乳腺癌MCF-7细胞系体外培养的效应.pdf
罗格列酮5-Aza干预乳腺癌MCF-7细胞系体外培养的效应.pdf
� 4 6 � 中 国 肿 瘤 临 床 2 0 0 9 年第 3 6 卷第 1 期
罗 格 列 酮 5 - A z a 干 预 乳腺 癌 MCF - 7 细 胞 系体 外 培 养 的效 应 ：l：
摘 要 目的 ：探 讨 过 氧化 物 酶 体 增 殖 物 激 活 受体 叫 ( P P A R ~ ) 激 动 剂 罗格 列 酮 ( 罗格 列 酮 )联 合 甲 基 转 移 酶 抑 制
剂 5 一 脱 氧 氮杂 胞 苷 ( 5 一 A z a - c d R ) 对雌 激 素 受体 阴 性 的 人 乳 腺 癌 细 胞 株 M C F 一 7 体 外培 养 的 抑制 作 用 ， 为 临 床 靶 向 治
疗 乳 腺 癌 提 供 基 础 试 验 依 据 。 方 法 ：取 对 数 生 长 期 生 长 良好 的 乳 腺 癌 M C F 一 7 细 胞 株 ， 按 2 ． 0 × 10
。
细 胞 ／孔 接 种 2 4 孔
板 ． 按 析 因 试 验 设 置 试 验 组 。 采 用 M T T 比 色 法 观 察 罗格 列 酮 和 5 一 氮胞 苷 对 体 外培 养的 M C F 一 7 细 胞 株 生 长 的 抑 制
作 用 ；用 倒 置 光 学显 微 镜 观 察 M C F 一 7 细 胞 用 药 前 后 的 形 态 学 变 化 ；应 用 流 式 细 胞 仪 检 测 细 胞 凋 亡 和 细 胞 周 期 变
化 。 结 果 ：罗格 列 酮 组 、 5 一 氮杂胞 苷 组 和 联 合 组 均 能 有效 的 抑 制 M C F 一 7 细 胞 生 长 (P < 0 ． 0 5 ) 。 3 组 的 细 胞 抑 制 率随 着
时 间 的 延 长 而 增 加 。 在 7 2 h 时 点 ， 罗格 列 酮 组 、 5 一 氮 杂胞 苷 组 、 联 合 组 和 对 照 组 的 早 期 凋 亡 百 分 率分 别 为 3 6 ． 9 ％ 、
2 2 ． 7 ％ 、 3 5 ． 5 ％ 、 2 4 ． 1 ％ ， 晚 期 凋 亡 百 分 率 分 别 为 】6 ． 0 ％ 、 4 3 ． 7 ％ 、 3 7 ． 7 ％ 、 4 0 -2 ％ ；3 组 的 G ，、 G ，期 ( D N A 合 成 前 期 ) 细 胞 分
别 为 8 l |3 ％ 、 6 7 _3 ％ 、 7 4 ． 5 ％ 和 6 ． 0 ％ ；S 期 ( D N A 合 成 期 ) 细 胞 分 别 为 2 ． 5 ％ 、 17 ． 1 ％ 、 0 和 3 8 ． 5 ％ 。 G ：期 ( D N A 合 成后 期 ) 细
胞 分 别 为 16 _3 ％ 、 15 ． 6 ％ 、 2 5 ． 5 ％ 和 5 5 ． 4 ％ 。 与 对 照 组 相 比 3 组 G 。 、 G ，期 的 阻 滞作 用 均 较 强 ( P < O ． 0 5 ) ， 联 合 用 药 未增 强
G 。、 G ，期 的 阻 滞作 用 ( P < 0 ． 0 5 ) 。 结 合 分 析 细 胞 凋 亡 实验 结 果 ， 联 合 用 药既 不 增 强 周 期 阻 滞 效 果 未增 强 凋 亡 效 果 ( ．P <
0 ． 0 5 ) 。 结 论 ：体 外培 养抑 制 试 验 证 明 罗格 列 酮 、 5 - A z a 均 能 有效 的 抑 制 乳 腺 癌 细 胞 株 M C F 一 7 的 生 长 。 罗格 列 酮 对
M C F 一 7 细 胞 株 的 干 预 作 用 是 通 过 周 期 阻 滞 完成 的 ， 5 一 氮胞 苷 能 干 预 细 胞 周 期 ， 其 可 能 的 机 制 是 诱 导 细 胞 成 熟 分 化 。
关 键 词 乳 腺 癌 M C F 一 7 细 胞 株 罗格 列 酮 5 一 脱 氧 氮杂胞 苷
d o i ：10 ． 3 9 6 9 6 ． i s s n ． 10 0 0 - 8 1 7 9 ． 2 0 0 9 ． 0 1 ． 0 1 3
R o s i g l i t a z o n e C o m b i n e d w i t h 5
一 A z a I n t e r f e r e s w i t h C e l l C y c l e i n M C F
- 7 C e l l s i n
V i t r o
M A B i n l in ， X U X ia o ， B A I J in g p in g ， G E N G Z h o n g l i ， Z H O N G H o n g ， X U Y o n g h u a ， Z HA N G D o n g h u i ， S U N G a n g
C o r r e s p o n d i n g a u t h o r ：B A I J in g p i n g ， E
- m a il ：b a ij in g p in c l@ y a h o o ． c a
D e p a r t m e n t o f B r e a s t a n d N e c k S u r g e r y ， A f il ia t e d T u m o r H o s p it a l o f X in j ia n g M e d ic a l U n iv e r s it y ， U r u m q i
8 3 0 0 1 1 ， C h i n a
A b s t r a c t O b j e c t i v e ： In o r d e r t o g a i n b a s ic e x p e r im e n t a l d a t a f o r c l in ic a l t a r g e t e d t h e r a p y o f b r e a s t c a n -
c e r
,
w e s t u d ie d t h e in h ib it in g e f e c t o f r o s ig lit a z o n e (t h e p e r o x is o m e p r o l if e r a t o r - a c t iv a t e d r e c e p t o r Y a c t iv a t o r )
c o m b i n e d w it h 5 一 a z a 一 2
'
- d e o x y c y t id in e (a d e m e t h y la t in g a g e n t in h ib it o r ) o n t h e M C F - 7 c e l l l in e in v it r o ． M e t h -
o d s ： F u l ly
． d e v e lo p e d M C F
． 7 c e l ls w e r e i n o c u la t e d i n 2 4 - w e ll t is s u e c u lt u r e p la t e s a t 2 ． 0 x 1 0
。
／L ． M T T a s s a y
w a s u s e d to o b s e r v e t h e in h ib it in g e f e c t o f r o s ig lit a z o n e a n d 5
- a z a 一 2
’
一 d e o x y c y t id i n e o n t h e g r o w t h o f M C F
一 7
c e l ls ． C h a n g e s in m o r p h o lo g y w e r e o b s e rv e d u s i n g in v e rt e d m ic r o s c o p y ． W e u s e d fl o w c y t o m e t r y (F C M ) t o e x
-
a m in e t h e a p o p t o s is r a t e a n d p e r c e n t a g e o f c e lls i n e a c h s t a g e o f t h e c e ll c y c le ． R e s u l t s ： M T T a s s a y r e s u lt s
s h o w e d t h a t t h e g r o wt h o f M C F
一 7 c e lls t r e a t e d w it h r o s ig l it a z o n e o r 5
一 a z a 一 2
’
- d e o x y c ~ id in e o r a c o m b i n a t io n
o f t h e tw o a g e n t s w e r e e f e c t iv e ly in h ib it e d c o m p a r e d w it h t h e c o n t r o l g r o u p (P < O． 0 5 )． T h e in h ib it o r y r a t e w a s
i n c r e a s e d a s t im e w e n t b y ． A t 7 2 h a ft e r t r e a t m e n t ， t h e a p o p t o s is r a t e s o f c e l ls in e a r ly c e ll c y c le in t h e r o s ig lit a
—
z o n e g r o u p ． t h e 5
一 a z a � 2
'
- d e o x y c y t id i n e g r o u p ， t h e c o m b in a t io n g r o u p a n d t h e c o n t r o l g r o u p w e r e 3 6 ． 9 ％ ，
2 2 ． 7 ％ ， 3 5 ． 5 ％ a n d 2 4 ． 1 ％ ， r e s p e c t iv e ly ． T h e a p o p t o s is r a t e s o f c e lls in la t e c e ll c y c le in t h e f o u r g r o u p s w e r e
1 6 ％ ， 4 3 -7 ％ ， 3 7 ． 7 ％ a n d 4 0 ． 2 ％ ， r e s p e c t iv e ly ． T h e p e r c e n t a g e s o f c e lls i n G O a n d G 1 p h a s e s c o m b i n e d in t h e
r o s ig lit a z o n e g r o u p ， t h e 5
- a z a - 2
'
- d e o x y c y t id in e g r o u p ， t h e c o m b in a t io n g r o u p a n d t h e c o n t r o l g r o u p w e r e
8 1 ． 3 ％ ， 6 7 ． 3 ％ ， 7 4 ． 5 ％ a n d 6 ％ ， r e s p e c t iv e ly ． T h e p e r c e n t a g e s o f c e lls in S p h a s e i n t h e a b o v e f o u r g r o u p s
w e r e 2 ． 5 ％ ， 1 7 ． 1 ％ ， 0 ％ a n d 3 8 ． 5 ％ ， r e s p e c t iv e ly 。 T h e p e r c e n t a g e s o f c e lls in G 2 p h a s e w e r e 1 6 ． 3 ％ ， 1 5 ． 6 ％ ，
m 本 文 课 题 受 新疆 少数 民 族 科技 人 才特殊培 养计划 科研 项 目( 编号 ：2 0 0 8 2 3 1 14 )~11
新疆 维吾 尔 自治 区 教育 厅 高校青年教师启 动基金 资助 ( 编号 ：X J E D U 2 0 0 6 5 2 5 )
① 在读研 究生 ② 兰 州军 区 乌鲁木 齐 总 医 院动 物实验科
通 讯作 者 ：白靖平 b a j i n g p i ” g @ y a h 0 0 Ⅲ
2 0HD9 年第 3 6 卷第 1 期 罗格 列 酮 5 一 A z a 干 预 乳 腺 癌 M C F 一 7 细 胞 系体 外培 养的 效 应 � 4 7 �
2 5 ． 5 ％ a n d 5 5 ． 4 ％ ． r e s p e c t iv e ly ． C o m p a r e d w it h c e l ls i n t h e c o n t r o l g r o u p ， c e lls in G O a n d G 1 p h a s e w e r e
b lo c k e d b y r o s ig lit a z o n e ， 5
- a z a - 2
'
- d e o x y c y t id i n e o r t h e c o m b in a t io n o f t h e t w o a g e n t s (P < 0 ． 0 5 )． C o m b in a t io n
o f t h e tw o a g e n t s d id n o t e n h a n c e t h e c e ll c y c le b lo c k i n g e f e c t o r t h e a p o p t o s is r a t e f P < 0 ． 0 5 )． C o n c l u s i o n ：
R o s ig l it a z o n e a n d 5
一 a z a 一 2
'
- d e o x y c y t id i n e c a n e f e c t iv e ly in h ib it t h e g r o w t h o f h u m a n b r e a s t c a n c e r c e lI Iin e
M C F 一 7 ． R o s ig lit a z o n e h a s a c e ll c y c le b lo c k i n g e f e c t a n d 5
- a z a � 2
’
d e o x y c ~ id in e in t e r f e r e s w it h c e l l c y c le ，
p o s s ib ly t h r o u g h in d u c t io n o f c e l l m a t u r a t io n a n d d if e r e n t ia t io n ．
K e y w o r d s H u m a n b r e a s t c a n c e r ；M C F 。 7 ：R o s ig l it a z o n e ；5
- a z a 一 2
’
一 d e o x y c y t id in e
乳 腺 癌 是 严 重 威 胁 女 性 健 康 的恶 性 肿 瘤 ， 全 球
每年 约 4 1 万 多 的女性 死 于 该病 ， 并 且 在 我 国 的发 生
率逐 年 升高
⋯
。 越 来越 多 的证 据 表 明 ， P P A R ŷ 激 动
剂具 有 显 著 的抗 肿 瘤 作用 ， 其作 用 机 制 涉 及 抑 制 细
胞 增 殖 、 诱 导 细 胞 凋 亡 及 分 化 、 抑 制 血 管 生 成 和 降
低 肿 瘤 侵 袭 能 力 等
乜
’
。 D N A 甲 基 化 抑 制 剂 5 一 氮
杂 一 2 l _ 脱 氧 胞 苷 ( 5 - A z a 一 2
’
d e o x y c y t i d i n e ，
5 - a z a — c d R ) 可 恢 复 P T E N 表 达 ， 从 而 抑 制 过 度 活 化
的信号 通 路 ， 并诱 导 抑 癌 基 因 的表 达
⋯
。 5 一 脱 氧氮
杂 胞 苷 被 认 为 是 通 过 非 竞 争性 地 结 合 到 真 核 生 物
D N A 上 甲基 转 移 酶 的结 合位点 ， 并 阻 断 甲基 转 移 酶
的 活 性 而 用 于 治 疗 肿 瘤 。 靶 向治 疗 作 为 新 的肿 瘤
治 疗 手 段 越 来 越 受 到 学 者 们 的 青 睐 。 靶 向治 疗 药
物 通 过 全 身给药 后 常产 生 意 想 不 到 的毒 副作 用 ， 靶
向药 物 的联 合应 用 可 以 减 轻 毒 副作 用 ， 减 少 单 药用
药剂 量 ， 联 合 用 用 药 成 为靶 向药 物 治 疗 的趋 势 ， 本
研 究 就 P P A R 吖 激 动 剂 罗 格 列 酮 和 5 一 杂 氮 一 2
’
脱 氧
胞 苷 干 预对 雌 激 素受体 阴性 ， H E R 一 2 阳性 的乳 腺 癌
细胞 株 M C F 一 7 的抑 制作 用 及 治疗 价 值 和 作 用 机 理
进 行 了 实 验 ， 观 察 联 合 用 药 和 单 独 用 药 之 间 的 差
异 ， 以及 对 临床是 否 有 联 合用 药 的价值进 行探讨 。
1 材料 与方 法
1 ． 1 主要 试 剂
M C F 一 7 细 胞 株 ( 上 海 麦 莎 公 司 ) ；R P M l l 6 4 0 培
养基 和胰蛋 白酶 ( 美 国 G i b c o 公 司 ) ；胎 牛 血 清 ( F B S )
( 杭 州 四 季青公 司 ) ；M rl lrl l 、 5 一 氮杂 胞 苷 、 二 甲 基 亚 砜
( D M S O ) ( S i g m a 公 司 ) ；罗 格 列 酮 ( 成 都 宇 洋 高科 技
有 限公 司 ) ；A n n e x i n V F I T C ／P I 细胞 凋 亡 检测 试 剂 盒
( 广 州 长 瑞 生 物 有 限 公 司 ) ；组 织 培 养 板 、 酶 标 板
( C o m i n g 公 司 ) 。
1 ． 2 试 验药物 的配 制
罗 格 列 酮 母 液 的 配 制 ：用 微 量 电 子 天 平 精确 称
取 罗 格 列 酮 4 7 ． 3 5 m g 溶 于 l Om l D M S O 中 配 制 成
1 0 m m o l ／L 溶 液 备用 ；5 一 氮胞 苷 母 液 的 配 制 ， 精 确称
取 5 一 氮 杂 胞 苷 2 4 ． 4 m g 溶 于 1 0 m l 双 蒸 水 中配 制 成
10 m m o l ／L 的溶液备用 。
1 3 主要 仪器
S W — L Z 一 2 F O 超 净 T 作 台 ；F o r m a 3 1 l 1 型 C O ：培
养 箱 ；O l y m p u s C K 4 0 倒 置 相 差 显 微 镜 ；B I O
— R A D —
M o d e l 5 5 0 酶标 仪 ( 中 国 ， 上 海 ) 。 C e l l L a b Qu a n t a s c
型 流式 细胞仪 (B e c k m a n c o u l t e r 公 司 ， 美 国 )
1 ． 4 细胞 培养
将 M C F 一 7 细 胞 培 养 于 含 1 0 ％ 新 生 牛 血 清 和
l ％ 双 抗 的 R P M l l 6 4 0 培 养 基 中 ， 3 7
0
C
， 1 0 0 ％ 湿 度 ，
C O ： 5 ％ (体积 分数 ) 的 C O ：培养箱 内 。
1 ． 5 M 1 Tr 法 检 测 罗 格 列 酮 和 5 一 氮 杂 胞 苷 对 乳 腺 癌
M C F 一 7 细胞株 生 长 的抑制作用 。
常规 培养 传代 M C F 一 7 乳 腺 癌细胞 ， 在对 数生 长
期 消 化 细 胞 ， 制 成 细 胞 悬 液 ， 按 2 ． 0 x 1 0 7 m l 接 种 于
2 4 孑L板 。 按 照 析 因 试 验 设 置 试 验 组 ： 1 ) 罗 格 列 酮
组 ；2 ) 5 一 氮 杂 胞 苷 组 ；3 ) 联 合 组 ；4 ) 对 照 组 ( 未 做 任
何处 理 ) 。 分别 给予 罗 格 列 酮 、 5 一 氮胞苷 2 5 斗 m o ~ L ；
连 续 培 养 2 4 h 、 4 8 h 、 7 2 h 、 9 6 h 、 1 2 0 h 、 1 4 4 h 、 1 6 8 h 、
1 9 2 h 。 每 次 取 3 孑L ， 行 M 1 Tr 实 验 ， 在 波 长 4 9 0 n m ／
4 5 0 n m 测 量 每孔 析 光 度 值 ， 打 印并 记 录数 据 。 计算
平 均 析 光 度 值 ， 根 据平 均析 光 度 值绘 制细 胞 生 长抑
制 曲线 ， 按 照 公 式 ：细胞 抑 制率 = ( 1 一 实验 组 A 值／x q
-
照 组 A 值 ) X 1 0 0 ％ 【
“
， 计算 细胞 生 长 抑 制率 。
1 ． 6 流 式 细 胞 仪 A n n e x i n V F I T C ／P I 双 标 测 定 罗 格
列 酮 和 5 一 氮 杂胞 苷 对 乳 腺 癌 M C F 一 7 细胞 株 干 预 的
凋 亡 效 应
按 1 ． 0 x 1 0
’
／m l 接种 对 数 生 长期 细胞 于 6 孔 板 。
按 照 析 因 试 验 设 置 试 验 组 同上 。 每组 设 置 3 个 复
孑L 。 连 续 培养 7 2 h ， 消化 、 收 集 细胞 ， 将 细 胞 悬 液 用
离 心 机 3 0 0 0 转 离 心 5 ra i n ， 将 上 清液 弃去 ， 细胞 沉 淀
用 7 0 ％ 酒 精 固定 ， 待检 。 上 机 检测 前 用 P B S 离心 清
洗 3 次 。 细 胞 沉 淀 用 1 0 0 I． t l 结 合缓 冲液混 悬 ， 向细
胞 悬 液 中加 入 1 0 斗 l A n n e x i n V — F I T C 和 5 ～ 10 ¨ l 的
碘化丙 啶 ( P I ) ， 混 匀 ， 避 光 室 温 孵 育 1 5 m i n ， 加 4 0 0 u l
结 合缓 冲液 上 C e l l L a b Qu a n t a S C 型 流 式 细 胞 仪 检
测 。 记 录细胞 凋 亡 值 。
1 ． 7 流 式 细 胞 仪 A n n e x i n V F I T C ／P I ， P I 单标 测 定 罗
格 列 酮 和 5 一 氮 杂 胞 苷 对 乳腺癌 M C F 一 7 细胞 株 干 预
的周期 阻滞效应
� 4 8 � 中 国 肿 瘤 临 床 2 0 0 9 年第 3 6 卷第 1 期
细 胞 干 预 及 收 集 实 验 步 骤 同上 。 向细 胞 悬 液
中加人 5 ～ 1 0 ¨ l 的 P I ， 混 匀 ， 避 光 室 温 孵 育 1 5 ra i n 后
加 4 0 0 ¨ l 结 合缓 冲液 上 C e l l L a b Qu a n t a s c 型 流 式
细胞 仪 检测 。 利用 细胞 仪 自带 工 作 站 和 分 析 软件
分析细胞周期 ， 记 录数据 。
1 ． 8 统计学处 理
数据分析用 S P S S 1 3 ． 0 统计软件 ， 计量 资料用 z ±
s 表示 ， 组 问 比较采 用 2 X 2 方差 分析 ， P < 0 ． 0 5 为 差 异
有统计学 意义 。 采用 E x c e l 表绘 制 生 长 抑 制 曲线 。
2 结 果
2 ． 1 M T T 法 检测 细胞 抑制率
由 A 值 测 定 结 果 绘 制 细 胞 培 养 生 长 曲线 见 图
1 。 根 据 A 值计算各组 细胞抑制率 ， 见 表 1 。
坦
型
米
整
量
舌
In
过
g
C
0
0
寸
0 ． 3 0 0
0 ． 2 5 0
0 ． 2 0 0
0 ． 1 5 0
O． 1 0 0
0 ． 0 5 0
0 ． 0 0 0
┏━
━
━
┓┃
┣
┫
┃
┣
／
， ～ 一
h 一
垒 中
^
n
┗┛
24 48 72 96 120 144 168 192
时 间 ( h )
图 1 罗格列 酮 2 5 肛 m o l ／L 联合 5 一 氮杂胞 苷 2 5 斗 m o l ／L 干 预
乳腺癌 M C F 一 7 细胞株体外培 养 曲线
F i g u r e 1 G r o w t h c u r v e s o f M C F
一 7 c e l l s t r e a t e d w i t h r o s i g l i t a z o n e
(2 5 斗 m o l ／L ) a n d 5 - a z a 一 2 。 d e o x y e y t i d i n e (2 5 ¨ m o l ／L )
表 1 罗格 列 酮 2 5 p m o l ／L 联合 5 一 杂氮胞 苷 2 5 u m o l 儿 干 预 MCF - 7 乳腺癌 细 胞 株体 外 培养抑 制率 ％
T a b l e l T h e i n h i b i t o r y r a t e o f r o s i g l i t a z o n e (2 5 肛 m o l／L ) a n d 5 - a z a - 2
’
- d e o x y e y t i d i n e (2 5 肛 m o l ／L ) o n M C F - 7 c e l l s
。
与对 照组 比较 P < 0 ． 0 5 ；
“
与联合组 比较 P < O． 0 5 ；
’
罗 格 列酮 组 与 5 一 杂 氮胞 苷组 比较 P < 0 ． 0 5
由图 1 和 表 1 可 看 出罗格 列 酮 组 、 5 一 氮杂胞 苷 组
和 联 合 组 均 能 有 效 的 抑 制 M C F 一 7 细 胞 生 长 (／9 <
0 ． 0 5 ) ， 3 组 的细 胞 抑 制率 随着 时 间 的延 长 而 增 加 。
罗 格 列 酮 组 在 干 预 1 4 4 h 后 抑 制效 果 优 于 5 一 杂 氮胞
苷 组 (P < 0 ． 0 5 ) 。 连 续 干 预 9 6 h 后 ， 联 合 组 的抑 制 效
果最 明显 ( P < O． 0 5 ) ， 说 明两 药有 明显 的协 同作用 。
2 ． 2 细 胞 凋 亡 检 测结果
由图 2 可 见 ， 在 7 2 h 时点 ， 罗 格 列 酮 组 、 5 一 氮 杂
胞 苷组 、 联 合组 和 对 照 组 的早 期 凋 亡 百 分率分别 为
3 6 ． 9 ％ 、 2 2 ． 7 ％ 、 3 5 ． 5 ％ 、 2 4 ． 1 ％ ， 晚期 凋 亡 百 分率 分 别
为 1 6 ． 0 ％ 、 4 3 ． 7 ％ 、 3 7 ． 7 ％ 、 4 0 ． 2 ％ 。 结 果 显 示 ， 与对 照
组 相 比 罗 格 列 酮 组 有 诱 导 早 期 凋 亡 的 作 用 ( P <
O． 0 5 ) ， 且 较 5 一 氮 杂胞 苷 组 作用 强 ( P < 0 ． 0 5 ) 。 联 合用
药未增 强 诱 导 早 期 凋 亡 的作用 (P > 0 ． 0 5 ) 。 与对 照 组
┏━┳
┓
┃
豢 澄
┣╋┫
黪 翳
‘
┗┻┛
相 比 5 一 氮杂胞 苷 组 、 罗 格 列 酮 组 和 联 合组 均无 诱 导
晚期 凋亡 的作用 (P < 0 ． 0 5 ) 。
2 ．3 细胞 周期检测 结果
由 图 3 可 见 ， 在 7 2 h 时 点 ， 罗 格 列 酮 组 、 5 一 氮 杂
胞 苷 组 、 联 合 组 和 对 照 组 的 G0、 G ，期 (D N A 合 成 前
期 ) 细 胞 分 别 为 8 1 -3 ％ 、 6 7 3 ％ 、 7 4 ． 5 ％ 和 6 ． 0 ％ ；S 期
(D N A 合 成 期 ) 细 胞 分 别 为 2 ． 5 ％ 、 1 7 ． 1 ％ 、 0 和
3 8 ． 5 ％ 。 G ：期 ( D N A 合 成 后 期 ) 细 胞 分 别 为 1 6 ． 3 ％ 、
1 5 ． 6 ％ 、 2 5 ． 5 ％ 和 5 5 ． 4 ％ 。 与对 照 组 相 比 3 组 G 。 、 G ，期
的阻滞作用 均较强 (P < 0 ． 0 5 ) ， 联合用 药未增 强 G 。、 G ，
期 的阻滞作用 (P < O． 0 5 ) 。 结合分析细胞 凋 亡 实验验
结 果 联 合 用 药 既 不 增 强 周 期 阻 滞 效 果 也 不 增 强 凋
亡 效 果 ( P < 0 ． 0 5 ) 。
B 1 ：早期 凋亡 细胞 百 分 比 ；B 2 ：晚期凋亡 (死 亡 ) 细胞百 分 比 ；B 3 ：活细胞 百 分 比 ；B 4 ：死 亡 细胞 百 分 比
图 2 流式细胞仪测 定罗 格 列 酮 2 5 “ m o l ／L 联 合 5 一 氮杂 胞苷 2 5 斗 m o l ／L 干 预 M C F 一 7 乳 腺癌细 胞体外 培养 凋亡 率
F i g u r e 2 T h e a p o p t o s i s r a t e o f M C F
一 7 c e l l s t r e a t e d w i t h r o s i g l i t a z o n e (2 5 斗 m o l ／L ) a n d 5 - a z a 一 2
’
一 d e o x y c y t id i n e (2 5 肛 m o l ／L )
2 【)(】9 年第 3 6 卷第 1 期 罗格 列 酮 5 - A z a 干 预 乳 腺 癌 M C F 一 7 细 胞 系体 外培 养的 效 应 � 4 9 �
～ t
．，佃 _ - � — ‘I ‘- 。 苎 ． ， 蔓_一 ‘- ! 哆。 一 ” 譬? ；
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图 3 罗 格列 酮 2 5 I．X m o l ／L 联合 5 一 氮杂胞苷 2 5 u m o l ／L 干预 乳腺癌 M C F 一 7 体外培养细胞 周期
F i g u r e 3 C e l l c y c l e d i s t r i b u t i o n o f M C F
一 7 c e l l s t r e a t e d w i t h r o s i g l i t a z o n e (2 5 p - m o l ／L ) a n d 5 - a z a 一 2
’
一 d e o x y c y t i d i n e (2 5 肛 m o ll L )
3 讨 论
随着 对 恶 性 肿 瘤 发 病 基 因 和 分 子 机 制 研 究 的
不 断深入 ， 以 肿 瘤 细胞 中特有 的结 构 、 功 能 区 域 、 分
子 基 团 、 生 物 酶 以 及 信 号 转 导 通 路 为 治疗 位 点 ， 通
过 调 节 或 阻 断 这 些 分 子 功 能 达 到 治 疗 疾 病 目 的 的
靶 向治 疗 药 物 已 经 问世 。 由于 这 类 药 物 具 有 非 细
胞毒性 和 靶 向性 的特 点 ， 主 要 对 肿 瘤 细 胞 起 调 节 作
用 和 稳 定性 作用 。 目前靶 向治疗 已 经 成 为继 手术 、
化疗 和 放 疗 等传 统 治 疗 之 外 ， 一 种 重 要 治疗 手 段 ，
并取得 了令人 鼓舞 的治疗 效果
” 。
。
过 氧 化 物 酶 体 增 长 因 子 活 化 受 体 (p e r o x i s o m e
p r o l i f e r a t o r
— a c t i v a t e d r e c e p t o r ， P P A R ) 最 初 由英 国 科
学 家 I s s e m a n n 和 G r e e n 于 1 9 9 0 年 发 现 ， 因 其 可 以 被
过 氧化 物 酶体增 殖 剂 激 活 而 得 名 ， 后 来被认 为属 于
核 激 素 受 体 ( n u c l e a r h o r m o n e r e c e p t o r ) 超 家 族 的 新
成 员
心]
。 P P A R 的 生 物 学 功 能 复 杂 ， 有 研 究
№’发 现
P P A R 1 在多种肿瘤 中均有表达 ， 当它 被其特异性 配
体激活 后 可 抑 制这 些 肿 瘤 细 胞 的生 长 ， 但具 体机 制
尚不 十 分 明确 ， 有 研 究认 为 可 能 与诱 导 凋 亡 、 细 胞
周期 阻 滞有 关
口 ‘
。 越 来 越 多 的证 据 表 明 ， P P A R ŷ 激
动剂具 有显 著 的抗 肿 瘤 作用 ， 其作用 机 制涉及 抑 制
细 胞 增 殖 、 诱 导 细 胞 凋 亡 及 分 化 、 抑 制 血 管 生 成 和
降低肿 瘤侵袭 能力 等
j 。
。 S a e z 等 的实验 表 明在 特定
情况 下 激 活 P P A R 1 可 促进 肿 瘤 的发 生 发 展 。 如果
已 有起 始 事 件 发 生 于 乳 腺 组 织 ， 那 么 增 强 P P A R ŷ
途径将促进 鼠乳腺肿瘤发 展 随 一。
P P A R 1 在乳 腺癌 中显 著表达 ， 在乳腺癌细胞 系
1 0 ⋯ 6 10 5 M 的 噻 唑 烷 二 酮 类 药 物 就 可 抑 制 增 殖
和 诱 导 分化 样 改 变 。 E l s t n e r 研 究 发 现 ， 在 体外 和 移
植 于 裸 鼠体 内的乳 腺 肿 瘤 上 ， 全 反 维 甲酸 (A T R A )
可 协 同 P P A R ŷ 配 体 抑 制 癌 细 胞 生 长 和 介 导 凋 亡 ，
同时 伴 随 显 著 的 b c l 一 2 水 平 的 降低 ， 而 在 M C F 一 7 细
胞 培 养 中 ， 强 迫 表 达 b c l 一 2 蛋 白会 阻 碍 上 述 协 同效
应 的 产 生 。 故 认 为 ， 由全 反 维 甲酸 和 P P A R 叮 配 体
介 导 的凋 亡 反 应 与 b c l 一 2 表 达 下 调 有关 阳’。 有 学 者
在 M C F 一 7 细胞 研 究 中发 现 ， P P A R 叫 配 体 阻 碍 乳 腺
癌 细胞 增 殖 和 C ，／G 。期 向 S 期 发 展 ， 在 一 定 程 度 上 可
能 与蛋 白酶体依赖 的细胞 周 期 蛋 白 D 1 和 雌 激 素受
体 仪 的 降解 有 关
n ⋯
。 已 知 绝 经 期 妇 女 乳 腺 脂 肪 局
部 合 成 的雌 激 素 与乳 腺 癌发 展 密切 相 关 ， 有学 者 发
现 P P A R 吖 配 体 可 阻 碍 雌 激 素 的 局 部 生 物 合成 ， 从
而 进 一 步 阐明 了 P P A R ŷ 抗 乳 腺癌 机 制
” “
。 本研 究
拟 探 讨 P P A R - y 激 动剂 罗 格 列 酮 联 合 甲基 化转移 酶
抑 制剂 5 一 氮 杂胞 苷 对 乳 腺 癌 细胞 株 M C F 一 7 体外 培
养 的抑 制作用 ， 研 究 发 现 联 合用 药早 期效果 较单独
用 药差 ， 用 药 早 期联 合 用 药 的生 长抑制率低 于 单 独
应 用 ， 提 示 P P A R 1 激 动 剂 不 适 合 与 甲基 化 转 移 酶
抑制剂联合治疗乳腺癌 。
5 一 脱 氧杂 氮胞 苷 是 一 种 具 有 多 种 特 异 的 生 物
学性 质 的核苷类 似物 ， 由于 5 一 脱 氧杂 氮胞 苷 能选 择
性 地 活 化 真 核生 物 的基 因表达 ， 甚 至 可 以 诱导 细 胞
分 化 ， 近 年来越 来 越 受 到重 视
n “
。 5 一 脱 氧杂 氮 胞苷
被 认 为是 ， 通 过非竞争性 地 结合 到真核 生 物 D N A 上
甲基 转移 酶 的结合位点 ， 并 阻 断 甲基 转移 酶 的活性
� 5 0 � 中 国 肿 瘤 临 床 2 0 0 9 年第 3 6 卷第 l 期
而 用 于 治疗 肿 瘤 。 但这 一 机 制 尚不 能 解 释 5 一 脱 氧
杂氮胞苷治疗肿 瘤过 程 中的所 有 现 象 ¨
”
。
约 1／3 人 类疾病 (包括肿瘤 )与 5 m C p G 去 N H 3 发
生 转移 突变有关
“⋯
。 有报 道 5 一 a z a c y t i d i n e 在 复发 性
和 顽 固性 急性 白血 病 和 慢 性 髓 性 白血 病 危象 时具
明显 疗效 ， 但在 实体瘤治疗作用 尚不 清楚 ¨
“
。
本研 究通 过 一 系列 体外 细胞 实验 ， 探讨 了过 氧
化 物 酶 体 增 殖 物 激 活 受 体 叫 (P P A R ŷ ) 合 成 配 体
罗 格 列 酮 即 过 氧 化 物 酶 体 增 殖 物 激 活 受 体 ŷ
( P P A R 叫 ) 激 动 剂 一 罗 格 列 酮 和 甲基 转 移 酶 抑 制 剂
5 一 脱 氧 氮 杂 胞 苷 ( 5 一 A z a — c d R ) 对 乳 腺 癌 M C F 一 7 细
胞 株 体外 培养 的抑制作用 ， 两 种 药物 均 能有 效 的抑
制 M C F 一 7 乳腺 癌 的生 长 ， 联 合用 药可 增 加其抑制作
用 。
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- - 3 a r e in v o l v e d in
p e r o x i s o m e p r o l i f e r a t o r
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a c ti v a t e d r e c e p t o r
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g a m m a a g o n is t s in
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A n n H e m a t o l
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- 1 8 3 ．
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t o t
- - -
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R e s T r e a t
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2 0 0 8
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c e p t o r
-
g a m m a li g a n d s i n d u c e d c e l g r o w th in h i b i ti o n a n d i t s in
-
fl u e n c e o n m a t r ix m e t a l l o p r o t e i n as e a c t i v i W in h u m a n m y e l o i d
l e u k e m i a c e Hs ~ ． C an c e r C h e m o th e r P h a r m a c o l ， 2 0 0 5 ， 5 6 (4)：
4 0 0 — 4 0 8 ．
1 0 L e e Y R ， Y u H N ， N o h E M ， e t a1 ． P e r o x i s o m e p r o l i f e r a t o r
-
a c ti -
v a t e d r e c e p t o r g a y f l l l l a a n d r e t in o i c a c i d r e c e p t o r s y n e r g i s ti c a ll y
u p
-
r e g u l a t e th e tu m o r s u p p r e s s o r p t e n in h u m a n p r o m y e l o i d
l e u k e m i a c e Hs [~ ． I n t J H e m a t o l ， 2 0 0 7 ， 8 5 (3 )：2 3 1 - 2 3 7 ．
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B r e a s t C a n c e r R e s T r e a t
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2 0 0 3
，
7 9 (1 ) ：6 3
— 7 4 ．
1 2 U s h ij i m a T ， N a k a j i m a T ， M a c k i t a T ． D N A m e th y l a t i o n as a
m ar k e r f o r th e p as t a n d fu t u r e ~ ． J G a s t r o e n t e r o l ， 2 0 0 6 ， 4 l (5)：
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1 3 P a t r a S K
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P a t r a A
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R i z z i F
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s In e — 5 — C — m e t h y l l D N A an d r e gu l a ti o n o f t r an s c r i p ti o n in t h e
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R e v
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2 0 0 8
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2 7 (2 ) ：3 1 5
- 3 3 4 ．
1 4 M o i s e e v a E P ． H e u k e r s R ． I n d o l e - - 3 - c ar b in o l - i n d u c e d m o d u l a -
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s p e c if c a n d
d o e s n o t c o r r e l a t e w i th c e l l d e a th ~ ． B r e as t C an c e r R e s T r e a t ，
2 0 0 8 ． 1 0 9 (3 1：4 5 l 一 4 6 2 ．
1 5 K a n g D W ， C h o i C H ， P a r k J y ， e t a 1． C i 廿t a z o n e in d u c e s c a s —
p a s e
- i n d e p e n d e n t a p o p t o s i s t h r o u g h d o w n
-
r e g u l a ti o n o f x i a p
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(3 ) ：5 5 1
- 5 6 1 ．
( 2 0 0 8 — 1 0 一 1 0 收稿 )
(2 0 0 8 - 1 l — 0 3 修 回 )
(邢 颖校对 )
关 于 公 布获 奖 论 文 的 通 知
本刊拟 开 辟
“
科 研 成 果通 告
”
栏 目 ， 关注 最 新科技 动态和 最新 发展 ， 把 握科技脉 搏 ， 报道 最新科
技 奖励 成果 。
凡 本 刊作 者 ， 在投稿前 ， 该课 题 已获 国家 、 地 方 、 全 军等各级 成果 奖 、 进 步奖及 其他 奖项 者 ， 请于
投稿 时随稿件 附上 各 奖项 复 印件 ；倘论 文在本 刊发表 后获奖者 ， 请获奖后 即 向本 刊编辑部寄交有关
复 印件 ， 并注 明 以发表该论 文 的题 目 、 作者 、 卷 、 期 、 页码 ， 以便核查 。
获 奖论 文题 录 、 作者名单将定 期在
“
科 研 成果通 告
”
栏 目予 以公 布 。
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