贲门腺癌组织中TSP1高甲基化与TGF-β1及细胞免疫水平的关系.pdf

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贲门腺癌组织中TSP1高甲基化与TGF-β1及细胞免疫水平的关系.pdf !癌症" !"#$%&% ’()*$+, (- .+$/%*# 0112# 03$40%&502365717 !基础研究! !!"#$%&’$" (&’)*%+,-. &-. /"01’$231# 4!"#$%&’(&)*+,-. $/01.% +’ 23 +34+5+6&" &7 2,8+&8939’+’ 23* +6’ ("&:&6;" 4<(;":;64<=26+&3 42’ 5;;3 7&>,? ";’>=6+38 +3 8;3; ’+=;3@+38 +3 ’&:9 ("+:2"< 4>:23 @2"@+3&:2’A B4+’ ’6>*< C2’ 6& +3D9’6+8269 649 ("#:#69" :964<=26+#3 #7 B01E 23* +6’ F#""9=26+#3 C+64 BGH-!. =;D;= 23? B @;== +::>3+6< +3 82’6"+@ @2"?+2 2?;3&@2"@+3&:2 $IJK%A 51$6+.## L964<=26+&, ’(9@+7+@ (&=<:9"2’9 @42+, "92@6+&, $L01% 2(("&2@4 2,? +::>,&4+’6&@49:+’6"< :964&? C9"9 >’9? 6& 9M2:+,9 649 :964<=26+&, ’626>’ &7 649 NO J(I +’=2,* 2,* 9M("9’’+&, &7 B01. ("&69+,& "9’(9@6+D9=<A B49 =9D9= &7 BIH-!. C2’ :92’>"9* 5< PQR0K 2,* B F9== +::>,+6< &7 IJK 5< 7=&C F<6&:96"< 2,2=<’+’A 71#,8$## B01. :964<=26+&, 7"9S>9,F< C2’ ’+8,+7+F2,6=< 4+849" +, 6>:&" ’(9F+:9,’ 642, +, F&""9’(&,*+,8 ,&":2= 6+’’>9’ $TNAUV D’W XWYV& !Z[W[[Y% 2,? ’\8,\7\@2,6< 4\84;" \, 0628;’ " 2,? # 6>$&" 6\’’>;’ 642, \, 0628;’$2,?%6>$&" 6\’’>;’ $!Z[W[N%W B01Y ("&6;\, ;M(";’’\&, C2’ ’\8,\7\@2,6]< ]&C;" +, 64; 6>$&" 6+’’>;’ 642, +, @&"";’(&,?+,8 ,&"$2] 6+’’>;’ $!Z[W[N% 2,? ’626+’6+@2]]< @&"";]26;? 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"97]9@6 649 5\&]&8\@2] 5942D\&>"’ &7 IJKW :1; <+%.## 82’6"\@ @2"?\2 2?9,&@2"@\,&$2& ‘aK $964<]26\&,& B01Y 89,9& BIH-!Y 89,9& B @9]] \$$>,\6< !摘 要" 背 景 与 目 的#凝 血 酶 敏 感 蛋 白 5$8"*(9:(&;($<#$=5&>?@5%是 一 种 内 源 性的血管生成抑制因子& 其在肿瘤 中的高甲基化可导致其基因沉默’ 本研究探讨 贲 门 腺 癌 中 >?@5 基 因 的 甲 基 化 状 态 及 其 与 >AB=!5 含 量 及 细 胞 免 疫 之 间 的 关 系’ 方法#应用甲基化 特异性 @.C 方法和免疫组织化学法分别检测贲门癌组织及 相应癌旁组织的 >?@5 甲基化状况和 >?@5 蛋白表达情况&DEF?G 方 法 检 测 贲 门 癌 患者血清中 >HB=!4 的含量&流 式细胞术对贲门癌细胞免疫水平进行分析’ 结果# 贲 门 癌 组 织 >?@4 甲 基 化 率 为 7IJKL $7K M 2N%& 显 著 高 于 癌 旁 组 织 $7O4L &!P QOQ5%’ "期 和#期 贲 门 癌 患 者 中 >?@5 基 因 甲 基 化 率 显 著 高 于$期 和%期 患 者 $!PQOQI%’贲门癌组织中 >?@5 的蛋白表达显著低于癌旁组织$!PQOQI%&且与其甲 基化状态之间有明显的相关性’ 贲门腺癌患者血清中总 >HR=!5 的含量高于正常 贲门腺癌组织中 4=>? 高甲基化与 4@AB!? 及 细胞免疫水平的关系 郭 炜" 董稚明" 郭艳丽" 杨植彬" 邝 钢" 单保恩 9+%%18&$2+- +C 6;D1%E1$6;8&$2+- +C 4=>? *1-1 <2$6 4@AB!? 81318 &-. 4 ’188 2EE,-2$; 2- *&#$%2’ ’&%.2& &.1-+’&%’2-+E& b9\ I>&& c!\-L\,8 ‘&,8& d2,-Q\ I>&& c!\-e\, d2,8& I2,8 f>2,8 2,? e2&-P, 0!2, 河北医科大学第四医院 肿瘤研究所" 河北 石家庄 QIQQ55 "#$#% &’()#* +(,-%-.-#" /0# 12.*-0 "2,3%-’4 25 "#$#% 6#7%)’4 8(%9#*,%-:" ;0%<%’=0.’(>" "#$#%" ?@??AA" !B CB &0%(’ 基金项目#河北省强势特色学科 基金资助项目#编号$冀教高 %0QQI&I0 号’(河北省科技厅科技 攻关项目%编号$QI0SN55N7& !"#$%&$ .($&#<%*+:,% T#&8#$/8#U% ?):V%/8& R()$<+8#($ (- W%:%# @*(U#$/%%0QQI"X(O I0&( @*(V%/8 (- 8"% T%;+*89%$8 (- ?/#%$/% +$< >%/"$(,(YZ (- W%:%# @*(U#$/% %X(O QI0SN[N7& 通讯作者# 单保恩 .(**%&;($<%$/% 8($ \+(=D$ ?"+$ >%,O$ 3NO744O3NQ2I77S D9+#,$:+(%$&"+$0QQ3]Z+"((O/$ 收稿日期#0QQ2=QK=7Q 修回日期#0QQ2=QS=4S !"#$ C M Y K 郭 炜!等! 贲门腺癌组织中 "#$% 高甲基化与 "&’(!) 及细胞免疫水平的关系 消化系统肿瘤是严重威胁人类健康的恶性肿 瘤! 贲门癌过去在肿瘤登记中经常被当作食管癌 或胃癌" 最近几年由于内镜筛查和病理诊断技术 的进步已经被独立出来! 一般认为"肿瘤的发生是 环境和遗传因素共同作用的 结 果 #)$! 在 肿 瘤 发 生 过程中"除了一些遗传学改变以外"目前认为表遗 传学的改变例如抑癌基因的高甲基化也参与了肿 瘤的发生发展" 并有可能是肿瘤发生过程中的早 期 事 件 #*$! 凝血酶敏感蛋白+) %,-./01/23/4564+)" "7$)&是一种内源性肿瘤血管生成调节因子"最近 的研究表明"7$) 作 为 候 选 抑 癌 基 因 " 可 抑 制 肿 瘤 的 血 管 生 成 #8$"其在多种肿瘤中的高甲基化可导 致其基因沉默"但其在贲门腺癌中的甲基化状态尚 无报道! 同时""7$) 是 "&9+!) 重要的体内活化因 子""7$) 的表达缺失可导致其失去对 "&9+!) 的活 化作用"而 "&9+!) 作为体内重要的细胞因子"在多 个方面参与肿瘤免疫"可抑制 " 细胞增殖"促进血 管生成 #:$! 本研究拟检测贲门腺癌中 "7$% 基因的 甲基化状态及其与血清中 "&9+!% 的水平’" 细 胞 免疫功能之间的关系" 旨在了解贲门腺癌中 "7$% 基因启动子区域甲基化状况" 并分析 "7$% 基因的 甲 基 化 失 活 与 "&9+!% 的 水 平 之 间 是 否 存 在 相 关 性" 探讨 "7$% 基因甲基化在贲门癌发生发展中的 作用! ! 材料与方法 !"! 材料 %;);) 主要仪器和试剂 蛋白酶 <%=>.?@ 公司&( 氢 醌 %76A0B 公 司&( 亚 硫 酸 氢 钠 %76A0B 公 司&( C6DB.5 EFG 纯 化 试 剂 盒 %$./0>AB 公 司 &(引 物 在 北京赛百胜公司合成(第一抗体为鼠抗人 "7$H 多 克 隆 抗 体 %GI;%"G1?B0&(人 "&9+!% JKL7G 试 剂 盒 %晶 美 生 物 工 程 有 限 公 司&(J36?2+MK"型 流 式 细 胞 仪’$J+B4,6+NEO’9L"N+B4,6+NE:’$J+B4,6+NEP’ 9L"N+B4,6+NE*Q 单 抗 %N/RS,>. 公 司 &(9L"N+B4,6+ 9/T38 单抗%>U6/2?6>4?> 公司&! %;%;* 研究对象和标本来源 研究对象均来自河 北医科大学第四医院 *VV:WXVVY 年间的贲门癌手 术 患 者"共 ZI 例"其 中 男 性 YO 例"女 性 XO 例"年 龄 OPWYP 岁" 中位年龄 QI;Q 岁! 全部患者术前均 未经化 疗 和 放 疗 ! 手 术 前 取 空 腹 外 周 静 脉 血 两 份 各 X 0K"一份抗凝"一份不抗凝"抗凝者取外周 血单个核白细胞用于 " 细胞免疫功能分析" 不抗 凝者分离血清保存于(PV[备用! 每例患者均取癌 旁黏膜组织及贲门癌原发灶" 以 HV\中性甲醛溶 液 固 定"常 规 制 作 蜡 块 保 存"用 于 EFG 的 提 取 和 免疫组织化学染色! 肿瘤组织及癌旁组织均经常 规病理诊断证实! 按照国际抗癌联盟%]LNN&标准 进 行 "F= 分 期 "ZI 例 肿 瘤 患 者 中#期 有 Y 例 %Y;8\ &" "期 有 8Q 例 %8I;Q\ &" $期 有 8Z 例 %:V;I\&"%期有 HQ 例%HQ;I\&! 按照肿瘤的病理 学分级":8 例%::;P\&为 高 分 化"8Q 例%8I;:\&为 中等分化"HP 例%HP;P\&为低分化! 另取同期 8V 份 健 康 人 的 抗 凝 和 不 抗 凝 的 外 周 血 作 为 对 照"其 中 男 性 HI 例"女 性 H: 例"年 龄 范 围 *ZWYV 岁"中 位年龄 QH 岁! !"# 方法 H;*;H 甲基化特异性 $N^%=7$&方法检测 "7$H的 甲基化状态 每个标本均取 HV &0 层厚石蜡切片 HVWXV 片"按 常 规 蛋 白 酶 < 消 化 "酚 _ 氯 仿 抽 提 法 提取癌组织和癌旁组织基因组 EFG! 每个样本取 Q &A EFG"用 * 00/S _ K FB‘a 变性处理 #Q$" 于 HV 00/S _ K 氢 醌 和 8 0/S _ K 亚 硫 酸 氢 钠 中 QV[反 应 HI -"然后" 用 C6DB.5 EFG 纯化试剂盒 纯 化 经 亚 硫酸氢钠处理的 EFG! 经亚硫酸氢盐处理后"EFG 中 的 N 转 变 为 ]" 而 基 因 的 N3& 岛 发 生 甲 基 化 后" 则不能发生这种改变" 根 据 此 原 理 设 计 相 应 的引物" 检测该基因是否发生甲基化! 用于检测 "7$H 甲 基 化 的 引 物 为 )Qb +"&N&G&N&""""""" GGG"&N+8c % 上 游 引 物 &"Qc +"GGGN"N&NGGGN NGGN"N&+8c %下游引物&%Y: 13&"用于检测 "7$) 非 甲 基 化 的 引 物 为 )Qc +&"""&&""&""&"""G"" &&""&+8c % 上 游 引 物 &"Qc +NN"GGGN"NGNGG GNNGGN"NG+8c%下 游 引 物 &%))Q 13&! 反 应 条 件 为)ZQ[ 预变性 )V 064( Z:[变性 8V 2" I*[退火 8V 2"Y*[延 伸 8V 2"8Q 个 循 环 (Y*[继 续 延 伸 )V 064! 扩增产物经 *\琼脂糖凝胶电泳"用 ]d 凝胶 对 照 组%!eV;VQ&"$期 和%期 贲 门 癌 患 者 血 清 中 总 "&9+!) 的 含 量 显 著 高 于#期 和"期 患 者 %!eV;VQ&"贲 门 腺 癌 患 者 细 胞 免 疫 功 能 低 于 正 常 对 照""7$) 发 生 甲 基 化 的 贲 门 癌 患 者 其 细 胞 免 疫 功 能 低 于 未 发 生 甲 基 化 的 贲 门 癌 患 者 %!e V;VQ&! 结论!"7$) 基因启动子区的高甲基化可能 参 与 了 贲 门腺癌的发 生发展过程" 其 高 甲 基 化 有 可 能 影 响 患 者 的 细 胞免疫功能! 关 键 词 !贲 门 腺 癌 ( EFG 甲 基 化 ( "7$) 基 因 ( "&9+!) 基 因( 细胞免疫 中图分类号!^Y8Q;* 文献标识码!G 文章编号!)VVV(:IYM%*VVZ&)*()*ZP(VI !"## C M Y K 电泳成像及图像分析系统进行图像分析! !"# 阳性 对 照 采 用 基 因 组 $%& 经 甲 基 化 酶 ""’’ (# "%)* +,-./,0 1234/5’$ (,67$ 8)9):.;$ !&#处理以后进行 <=>$ 阴性对照用灭菌双蒸水取代 $%? 模板进行 <=>! 为进行 !"< 检测的质量控制$随机选取 @AB 标 本进行重复实验! @CD7D 免 疫 组 织 化 学 "< 法 检 测 E"<@ 的 蛋 白 表 达 石蜡切片常规脱蜡至水$FB甲醇 GDHD 封闭内 源性过氧化物酶$微波修复 @I J2,! 依次加入一抗 及相应生物素化二抗和辣根过氧化物酶标记的三 抗$$&8 显色$ 苏木精复染细胞核$ 常规脱水$透 明$ 中性树胶封片! <8" 取代一抗作为空白对照$ 其余步骤同上! 正常胃黏膜组织作为 E"<@ 表达的 阳性对照! @KD7F +4("L 方法检测 EMNO!@ 的含量 按 EMNO!@ 免 疫 检 测 试 剂 盒 说 明 书 分 别 检 测 血 清 中 总 EMNO!@ 含量和活性 EMNO!@ 含量!其中总 EMNO!@ 检 测 样 本 需 经 @ J3. P 4 盐 酸 化 处 理 $ 而 活 性 EMNO!@ 检测则采用非经盐酸化处理的血清! @7D7Q 流 式 细 胞 术 检 测 =$FR%=$ST%=$UT%=$QTO =$DITON3VWXTOE:)- 细胞 所 有 研 究 对 象 均 取 外 周 血单个核细胞 "<8Y=#$ 检测 =$FT%=$QT%=$UT% =$QTO=$ZITON3VWFTOE:)- 细胞比率! [KDKI 统计学分析 数据统计分析采用 "<""[[KI 软件包进行!各组间的差异分别用卡方检验%方差 分析和 ! 检验进行分析$相关性分析采用"W)/:J/, 分析$双侧检验$"\]K]I 为有统计学意义! ! 结 果 !"# 贲门腺癌中 $%&’ 基因甲基化状态 ^_ 例 贲 门 腺 癌 组 织 及 相 应 癌 旁 组 织 均 成 功 进行了 Y"< 分析"图 [#! ^_ 例贲门腺 癌组织的甲 基化率为 FIKQ‘$ 而相应癌旁正常黏膜有 F 例 检 测到甲基化$占总例数的 FK@B$癌组织 E"<@ 基因 甲基化率显著高于癌旁正常组织""\]K]]@#!按照 E%Y 分 期 进 行 统 计 分 析$"期 和#期 贲 门 腺 癌 患 者 中 E"<@ 基 因 发 生 甲 基 化 的 比 率 显 著 高 于$期 和%期患者"&DaQKQ]$"a]K]F_#! 按照贲门癌的病 理 分 级 进 行 统 计 分 析$高%中%低 分 化 肿 瘤 组 发 生 甲 基 化 的 比 例 差 异 无 统 计 学 意 义 "&Da@K@^$"a ]KII@#$见表 @! !"! 贲门腺癌中 $%&’ 蛋白表达情况 E"<@ 蛋 白 免 疫 组 化 染 色 为 胞 浆 和 P 或 基 质 着 色"图 D#! ^_ 例贲门腺癌组织中有 Db 例蛋白表达 阴 性$而 相 应 的 癌 旁 正 常 组 织 的 蛋 白 表 达 均 呈 阳 性$二 者 相 比 差 异 有 统 计 学 意 义""\]K]][#!"期 和’期 贲 门 腺 癌 患 者 E"<[ 基 因 蛋 白 表 达 显 著 低 于$期 和%期 患 者 "&DaQKUI$"a]K]DU#! 高 中 低 分 化 癌 组 的 蛋 白 表 达 率 差 异 无 统 计 学 意 义 "&Da [KIQ$"a]KQ_F#! 未 发 生 E"<[ 高 甲 基 化 的 肿 瘤 组 织 均 为 阳 性 蛋 白 表 达 $E"<[ 基 因 启 动 子 区 的 甲 基 化 与 其 蛋 白 表 达 缺 失 有 明 显 的 相 关 性 ""\ ]K][#! 图 [ E"<[ 基因甲基化分析 N2-c:) [ Y)de;./d23, ’d/dc’ 3f E"#[ 2, dcJ3: d2’’c) /,0 63::)’W3,02,- ,3:J/. d2’’c) E$ dcJ3: d2’’c)& g$ ,3:J/. d2’’c)& c$ c,J)de;./d)0 -),)& J$ J)de;./d)0 -),)& Y$ $gL J/:h):K =/’) [$ de) dcJ3: 2’ fc..; J)de;./d)0$ *e):)/’ de) 63::)’W3,02,- ,3:J/. d2’’c) e/’ / 9):; f/2,d 5/,0 0)J3,’d:/d2,- J)de;./d23,& =/’) Z$ dcJ3:O’W)62f26 J)de;./d23,& =/’) F$ 53de 3f dcJ3: /,0 63::)’W3,02,- ,3:J/. d2’’c)’ /:) c,J)de;./d)0K EgY ’d/-) $ % " ’ #/de3.3-26/. 02ff):),d2/d23, i).. Y30):/d) #33: Y [ ^ [_ U [F [F U j _ D_ DF b F] DD [] ]K]F_/ ]KII[5 k ] b [Q _ [] [] b T b ZU ZI ^ FF ZI [[ ]K]ZU/ ]KQ_F5 Y)de;./d23, ’d/dc’ 3f E"#[ #:3d)2, )VW:)’’23, 3f E"#[ "" 表 ! "# 例贲门癌组织中 $%&! 基因甲基化和蛋白的表达 $’()* + ,*-./)’-012 3-’-43 15 $%&+ 6*2* ’27 *89:*33012 15 $%&! 9:1-*02 02 9’-0*2-3 ;0-. 6’3-:0< <’:70’ ’7*21<’:<021=’ !>?@" M:3cW /" 9/.c) 3f "d/-)’ " /,0 ’ W/d2),d’ 9’K "d/-)’ $/,0 %W/d2),d’& 5" 9/.c) /J3,- de:)) 02ff):),d2/d23, -:3cW’K Y$ J)de;./d)0& c$ c,J)de;./d)0K 郭 炜!等K 贲门腺癌组织中 E"#[ 高甲基化与 EMNk![ 及细胞免疫水平的关系!"## C M Y K ! " 图 # 贲门腺癌组织中 $%&’ 的蛋白表达!%&(#)*" +,-./0 # 123/044,56 57 $%&’ 3/580,6 ,6 -948/,: :9/;,9 9;065:9/:,65< 8,44.04 !%&=#**" !# 354,8,>0 489,6,6-$ "# 60-98,>0 489,6,6-? !"# 贲门腺癌中 $%&’!( 水平 贲 门 腺 癌 患 者 血 清 中 总 $@+A!’ 的 含 量 为 !’BC#DE?)""- F G#高于正常对照的!’’?HDI?’""- F G !!J)?)K"#但其活性 $@+A!’ 的含量!L?#DK?)""- F G 与正常对照的含量 !L?LDM?’""- F G 相比差异无统 计学意义 !!N*C*K"% #期和$期贲门腺癌患者血 清 中 总 $@+A!’ 的 含 量 显 著 高 于%期 和&期 患 者 !!J*C*K"%进一步分析了 $%&’ 甲基化与血清 $@+A !’ 水平之间的关系#结果显示 $%&’ 发生甲基化的 贲 门 腺 癌 患 者 其 血 清 $@+A!’ 的 总 水 平 与 未 发 生 甲 基 化 的 贲 门 腺 癌 患 者 相 比 差 异 无 统 计 学 意 义 !!N*C*K"$$%&’ 发 生 甲 基 化 的 贲 门 腺 癌 患 者 其 活 性 $@+A!’ 的 含 量 低 于 未 发 生 甲 基 化 的 贲 门 腺 癌 患者#但差异无统计学意义!!N*C*K" #见表 #% 郭 炜!等C 贲门腺癌组织中 $%&’ 高甲基化与 $@+O!’ 及细胞免疫水平的关系 @/5.3 P568/5Q @P! 398,0684 %89-04% 96; & @P! 398,0684 %89-04 # 96; ’ @P! 398,0684 @P! 398,0684 R,8S $%&’ <08STQ98,56 @P! 398,0684 R,8S5.8 $%&’ <08STQ98,56 G0>0Q 57 8589Q $@+A!’ !"D4" ’’CHDIC’ ’BC#DEC* ’IC*DMCL #*CLDKCI ’BC*DMC’ ’BCIDKC# ! *C**#9 *C**’U *CM#I: G0>0Q 57 9:8,>0 $@+A!’ !"D4" LCLDMC’ LC#DKC* LC*DIC# LCIDMC* BCHDIC’ LCEDMC# ! *C#KI9 *CIKEU *C’*E: 表 ! "# 例贲门腺癌患者血清中 $%&’!( 水平 !") * +" $,-./ ! $0/ ./1/.2 34 $%&’!( 56 7,85/682 9580 %:; !") * +" 9@P! 398,0684 >4C :568/5Q$ U%89-04 # 96; ’ 398,0684 >4C %89-04%96; &398,0684$ :@P! 398,0684 R,8S5.8 $%& <08STQ98,56 >4C @P! 398,0684 R,8S $%&’ <08STQ98,56C !") 贲门腺癌患者细胞免疫水平及与 $*+( 甲基 化的关系 贲门腺癌患者 PVIW 细 胞&PVMX 细 胞 和 PVMX Y PVLX 比值低于正常对照 !!J*C*K"# 而 PVLX 细 胞 和 PVMXAPV#KXA+523IXA$/0- 细 胞 高 于 正 常 对 照 !!J*C*K"% 按照 $Z[ 分期进行分析##期和’期 贲 门 腺 癌 患 者 PVI X 细 胞 &PVM X 细 胞 和 PVM X Y PVL X 比 值 低 于%期 和&期 患 者 !! J*C*K"# 而 PVLX 细 胞 &PVMXAPV#KXA+523I XA$/0- 细 胞 高 于% 期和&期患者!!J*C*K"% $%&’ 发生甲基化的贲门 腺 癌 患 者 与 未 发 生 甲 基 化 的 贲 门 腺 癌 患 者 相 比# PVIX 细 胞 无 明 显 差 异 # 而 PVMX 细 胞 和 PVMX Y PVLX 比 值 明 显 低 于 未 发 生 甲 基 化 的 贲 门 腺 癌 患 者#PVLX 细 胞 和 PVMXAPV#KXA+523IXA$/0- 细 胞 明 显高于未发生甲基化的贲门腺癌患者 !!J*C*K"# 见表 I% !"#! C M Y K 郭 炜!等! 贲门腺癌组织中 "#$% 高甲基化与 "&’(!) 及细胞免疫水平的关系 &*+,- .+/0*+1 234 -5067/08 905:78" 5/; # 2<4 -5067/08 905:78 $ 5/; % 2<4 -5067/08 2<4 -5067/08 =60> ?70>@1506+/ +A "#BC 2<4 -5067/08 =60>+,0 ?70>@1506+/ +A "9BC <DEF!G" HIJIKLJM MMJHKNJM OPJQKRJR STJUKVJW XYJWKVJP XXJPKRJV .ZYF!G" YXJWKVJP [UJPKRJV \]J\KVJP ^RJ]KRJW ^WJ^KWJ] UPJ]KVJP .ZWF!G" ^RJVKWJ] UWJ]KVJP UTJRKRJU \^J^KRJP \TJWKXJP U]JPKVJW .Z\F _ .ZWF )JVKTJU TJPKTJ‘ CJ‘KTJU TJVKTJ‘ TJWKTJ‘ CJCKTJU "*7:!G" XJ‘KTJR RJCKCJR XJPKCJ‘ WJ‘K‘JT RJPKCJX VJ‘KCJC 表 ! 贲门腺癌患者细胞免疫功能 "#$%& ! "’& ()#)*( +, " -&%% .//*0.)1 +, 2#).&0)( 3.)’ 456 !!7(" ! 讨 论 "9$aC 是血小板凝血酶敏感蛋白家族的一员# 此 家 族 主 要 包 括 X 个 成 员 #"9$C 和 "9$‘ 是 三 聚 体#而 "9$U$"9$\ 和 "9$X 是五聚体% 它们之间有 高度的同源性#但是由于启动子的不同#它们在不 同组织中的表达存在差异% CPRC 年 "9$C 作为一个 高分子量的糖蛋白被发现# 分子量为 \XT TTT#最 初研究证实 "9$C 由血小板合成分泌#随后的研究 发现#成纤维细胞$单核细胞$巨噬细胞$平滑肌细 胞以及一些肿瘤细胞均可合成和分泌 "9$C&VbW’% 在 生理条件下# 血浆 中 "9$C 的 浓 度 范 围 在 VTcUdd /: e ?f 之间 &P’% "9$) 可参与多种生理过程#包括细 胞 黏 附$迁 移$增 殖$细 胞 间 相 互 作 用$血 管 发 生$ 肿瘤细胞转移$炎症和凝血作用等 &)d#))’%研究表明# 乳 腺 癌 细 胞 株 产 生 的 "9$) 可 抑 制 肿 瘤 的 进 展 # "9$) 的表达与黑色素瘤$肺癌$乳腺癌恶性进展呈 负相关 &)‘#)U’% 实 验 证 明 "9$) 是 一 种 内 源 性 的 血 管 生 成 抑 制因子#在体外表现为诱导内皮细胞凋亡#在体内 表现为抑制血管新生# "9$) 已被证实是血管生成 抑制剂并能有效地抑制侵袭性生长 &)‘’% "9$) 作用 机制复杂#可以与毛细血管表面的 .ZUV 受体结合 而完成抗血管生成的作用# 又可与 "&ga! 的前体 结合#间接或直接释放活化的 "&ga!#而 "&ga! 则 可通过稳定肿瘤的脉管系统而促进肿瘤生长和侵 袭 &\’% 有研究表明在多种肿瘤中 "9$) 基因的高甲 基化导致其蛋白表达缺失# 参与了肿瘤的发生发 展过程 &)\#)X’#但其在贲门腺癌中的甲基化状态研究 较少% 本研究发现 "9$) 基因在贲门腺癌组织中可 发生高频率的甲基化!UXJ\G"#并有相应的蛋白表 达缺失#提示由于 "9$) 基因启动子区发生甲基化 导致的基因沉默可能是贲门腺癌中此基因失活的 重要原因之一% 贲门癌组织中 "9$) 蛋白表达显著 低于癌旁正常组织# 但发生甲基化的肿瘤组织其 蛋白表达仍可呈阳性% 肿瘤组织中混杂有正常组 织是其原因之一# 但基因异质性甲基化或一个等 位基因发生甲基化也是一个重要的原因% 在我们 的研究中也发现蛋白表达呈阳性而同时发生甲基 化的组织# 其甲基化均表现为不完全甲基化的情 况% 此外# 目前认为 Zhi 甲基化主要在转录水平 抑制基因的表达# 有研究认为 .-& 岛甲基化的密 度与转录的抑制程度有关 &%V’# 弱的启动子能被密 度较低的甲基化完全抑制# 而当启动子由增强子 增强时# 即可恢复转录功能% 部分肿瘤组织可能 "9$% 基因启动子甲基化程度不足以抑制转录而导 致了发生甲基化的组织其蛋白表达仍可为阳性% "&ga! 家 族 通 过 "&ga! e 9?5; 信 号 转 导 通 路 发 挥 重 要 的 生 物 学 效 应# 它 调 节 细 胞 的 增 殖$分 化$凋亡$迁移$黏附以及胞外基质的产生#并且在 胚胎发育以及成人组织修复和免疫调节中也行使 重要作用 &\’% "&ga! 是细胞生长强有力的抑制物# 它对生长的抑制是通过改变细胞周期调控成分的 表达或功能而实现的% 在肿瘤发生过程中#"&ga! 的作用是双相的#早期#当细胞对 "&ga! 的抗增殖 效应仍有反应时#"&ga! 起着肿瘤抑制作用#而在 恶性进展期# 当细胞获得了对 "&ga! 生长抑制作 用的耐受性时# "&ga! 又起着肿瘤促进作用 &%d’%本 研究发现#贲门腺癌患者血清中 "&ga!% 的水平明 显升高#并且随着肿瘤的进展其水平也明显升高# 提示血清中 "&ga!% 的含量与贲门癌的发生发展$ 浸润转移密切相关% "9$% 是 "&ga!% 体内重要的 活化因子#它可通过与 "&ga!% 前体相 关 肽!fi$" 接触反应#致 fi$ 与 "&ga!% 非共价结合解离#并 相 应 诱 发 由 前 两 者 结 合 导 致 "&ga!% 不 能 与 其 受 体作用而处于无活性状态% 为了验证 "9$% 是否影 响贲门腺癌患者 "&ga!% 的活化#我们进一步分析 了贲门腺癌患者血清中活性 "&ga!% 的含量#结果 显示虽然 "9$% 甲基化阳性患者组活性 "&ga!% 的 含量低于 "9$% 甲基化阴性患者组#但不具有统计 !"#$ C M Y K ...